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EasyZol Reagent
貨(huo) 號(hao)：TQ102
保(bao)存條(tiao)件：室溫保存(2~8°C更佳）
重要提示(shi)：本品(pin)具有毒性(xing)和腐蝕性(xing)。使用本品(pin)應穿戴防護物品(pin)。如果(guo)不小(xiao)心接觸(chu)，應立即用大量水(shui)沖(chong)洗并前往醫院治療。
產品介紹：
本本品(pin)(pin)是(shi)廣譜(pu)型總RNA提取(qu)試劑(ji)。本品(pin)(pin)適用(yong)范圍廣泛，可(ke)以從動物(wu)(wu)(wu)組(zu)織、植物(wu)(wu)(wu)材料、微生(sheng)物(wu)(wu)(wu)及細胞(bao)等樣品(pin)(pin)中提取(qu)總RNA。本品(pin)(pin)對(dui)組(zu)織(小(xiao)(xiao)量(liang)：50-100mg或(huo)者大(da)量(liang)：≥1g)或(huo)者細胞(bao)(小(xiao)(xiao)量(liang)：5 x 106個或(huo)者大(da)量(liang)≥107個)均(jun)有良好分(fen)離效果。EasyZol在樣品(pin)(pin)充分(fen)裂解后能保護RNA完整性，提取(qu)后的(de)RNA可(ke)用(yong)于各種(zhong)分(fen)子生(sheng)物(wu)(wu)(wu)學實驗，如RT-qPCR(新貝生(sheng)物(wu)(wu)(wu) #R201、 #R202、 #Q204)。
產品組(zu)成(cheng)：
| 組分 | TQ102-01 |
| EasyZol Reagent | 100 mL |
注意(yi)事(shi)項：
1. 樣品用EasyZol裂解或者勻漿后，置于負70℃可放置一個月以上。RNA容易降解，建議提取后盡快進行后續實驗。
2. 自備試劑：氯仿、異丙醇(新開封或提取RNA專用)、75%乙醇(DEPC水配置)、RNase Free water。
3. 自備儀器、耗材：冷凍離心機(4℃)、離心管、移液器
產品(pin)使用：
A.樣品裂解
1.1 植(zhi)物組織：取新鮮植(zhi)物組織在液氮(dan)中(zhong)(zhong)充(chong)分(fen)研磨或(huo)者將(jiang)植(zhi)物組織剪碎后直接在EasyZol中(zhong)(zhong)迅速研磨。每(mei)30-100mg組織加(jia)1mLEasyZol，一般樣品體積(ji)(ji)不要超過EasyZol體積(ji)(ji)的1/10。
1.2 動物(wu)組(zu)織：取(qu)新鮮或(huo)者負70℃凍(dong)存的動物(wu)組(zu)織盡量剪碎，每(mei)30-100mg組(zu)織加1mL EasyZol，勻漿(jiang)儀進(jin)行勻漿(jiang)處理(冰上)。或(huo)者在液氮中研磨后加入1mL EasyZol混勻。一般(ban)樣(yang)品(pin)體積不要(yao)超過EasyZol體積的1/10。
1.3 單層培養細胞：盡量去除培養板上的培養液，按照10cm2培養板面積加入1mL的比例加入EasyZol后，反復吹打裂解細胞。（當EasyZol量不足可導致提取的RNA有DNA污染）
1.4 細胞(bao)懸液：離心(xin)收集(ji)細胞(bao)。每(mei)(5-10)x106的動(dong)物細胞(bao)、植物細胞(bao)、酵母細胞(bao)或(huo)者(zhe)(zhe)每(mei)1x107細菌加1mLEasyZol后，用移液器反(fan)復吹打來(lai)裂(lie)解(jie)細胞(bao)。破裂(lie)某些酵母或(huo)者(zhe)(zhe)細菌可能需要使用勻漿器。
B.室溫放置
2. 勻漿后樣品劇烈震蕩后在室溫放置5分鐘以使核蛋白完全解離。
3. 可選步驟：4℃，12000rpm離心10分鐘去除雜質，取上清。(如果樣品中含有較多蛋白質、脂肪、多糖、肌肉、塊莖結節等可離心去除。離心后的沉淀包含細胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清含有RNA。處理脂肪組織樣品，可去除上層大量油脂)
C.加氯仿，4℃離心
4. 每1mLEasyZol加0.2mL氯(lv)仿，蓋緊(jin)管蓋，劇烈震蕩15秒并在室溫下放置3分鐘(zhong)。
5. 4℃，12000rpm離心15分鐘(zhong)離心后分三層(ceng)(ceng)：下(xia)層(ceng)(ceng)紅色(se)有機苯(ben)酚氯仿(fang)層(ceng)(ceng)，中間層(ceng)(ceng)，上(shang)層(ceng)(ceng)無色(se)的水樣層(ceng)(ceng)(RNA)。上(shang)層(ceng)(ceng)體積(ji)大(da)約為所加的EasyZol體積(ji)的50-60%。(下(xia)層(ceng)(ceng)和中間層(ceng)(ceng)是蛋白和DNA，也可提取)
D.加異丙(bing)醇，4℃離心
6. 將上層轉移到新的離心管(剪槍頭，取60%-70%上層體積，避免擾動中間層)，加入等體積異丙醇，顛倒混勻后室溫放置10分鐘。
7. 4℃，12000rpm離心10分鐘離心，棄上清。(RNA沉淀在離心前通常不可見，離心后在管側壁或者管底形成膠狀沉淀)
E.加75%乙醇，4℃離心
8. 加入1mL 75%乙醇洗滌沉淀。
9. 4℃，12000rpm離心5分鐘，棄上清。(注意不要弄丟RNA沉淀，剩余少量液體可用移液器緩慢吸出)
F.晾干，溶(rong)解(jie)RNA
10. 室溫晾干3分(fen)(fen)鐘、加入(ru)30-100μL RNase free water，充分(fen)(fen)溶解(jie)(jie)RNA，溶解(jie)(jie)后的RNA立(li)即用于(yu)下游(you)實驗或保存在負70℃。沉淀不要過(guo)分(fen)(fen)干燥，以免難于(yu)溶解(jie)(jie)。
本品僅供(gong)科(ke)研使(shi)用，不能(neng)用于(yu)人和動物醫療診斷(duan)
