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HyperPure RNA Isolation Kit
貨 號：TQ301
保(bao)存條件：室溫保存
產品(pin)介紹：
本品可快速從106-107培養細胞或者從10mg-20mg動物組織提取總RNA(miRNA除外，脂肪組織除外)，本品采用特殊配方無需酚氯仿抽提,試劑盒中HyperPure gDNA-Filter Columns能有效地去除雜質和gDNA，HyperPure RNA Columns能高效地結合RNA，搭配優化后的Buffer，得到的總RNA純度高。所得的RNA可用于PCR(貨號R201、T202、G302)，qPCR(貨號R202、
Q204)等實驗。
產品(pin)組成：
| 組分 | TQ301-01 (50次) |
| Lysis Buffer（裂解緩沖液） | 30 mL |
| Wash Buffer A(清洗液) | 40 mL |
| Wash Buffer B*(清洗液,首次使用要加無水乙醇) | 20 mL |
| Elution Water*(洗脫液) | 10 mL |
| HyperPure gDNA-Filter Columns & collection tubes(DNA吸附柱和收集管套件) | 50套 |
| HyperPure RNA Columns & collection tubes(RNA吸附柱和收集管套件) | 50套 |
| RNase Free Tubes(1.5 mL無RNA酶離心管，用于裂解樣本和最后一步洗脫使用) | 100個 |
Wash Buffer B*首次(ci)使用加80ml無水乙(yi)醇(chun)，Elution Water*推薦存(cun)放在4℃或(huo)者-20℃。
注意事項(xiang)：
Wash Buffer B首次使用加80ml無水乙醇。
盡量使用新鮮樣本，以保證RNA不被降解。樣本不要使用過多過大，否則可能堵塞Columns。
本說明書推薦的最適細胞量能滿足大部分樣本，對于核酸含量過高或者過低樣本，可酌情減少或者增加起始樣本量。
提取過程在室溫進行，試劑不可冷凍(如有沉淀37℃加熱溶解)，以免產生沉淀堵塞純化柱，最后得到的RNA要分裝冷凍保存。
產(chan)品使用：
1.1裂解(jie)細(xi)胞(bao)：不同培養器皿對應(ying)的細(xi)胞(bao)量(liang)如下圖，其他類型器皿按照面積計算估(gu)計細(xi)胞(bao)量(liang)：
| 培養器皿 | 單孔面積/cm2 | 細胞量 |
| 12孔培養板 | 4.5 | 1 × 106 |
| 6孔培養板 | 9.6 | 2.5 × 106 |
| 3.5 cm 培養皿 | 8 | 2 × 106 |
| 6 cm 培養皿 | 21 | 5.2 × 106 |
| 25 cm2 培養瓶 | 25 | 5 × 106 |
吸凈培養器皿里的培養液，按照106-107細胞量加入500μl Lysis Buffer，用移液器反復吹打(或者細胞刮刀刮下細胞)，直至細胞全部脫落，轉移到1.5ml RNase Free Tubes，充分顛倒混勻10次，靜置5分鐘。
a. 此步驟也可用胰酶消化貼壁細胞8000rpm離心2分鐘后，加入500μl Lysis Buffer后續操作如上。
b. 懸浮細胞收集8000rpm離心2分鐘后，加入500μl Lysis Buffer后續操作如上。
c. 如果樣本不立即提取需要保存，可以在上述細胞加500μl Lysis Buffer充分裂解之后（細胞內也有RNase酶，所以要裂解充分，利于Lysis Buffer抑制RNase
酶），保存到-80℃冰箱
1.2 裂解組織：
可選一：液氮研磨
將10mg-20mg(10mg組織約等于米粒大小)樣本轉移至液氮預冷的研缽中，用研磨杵研磨樣本（研磨中不斷補加液氮），直至研磨成粉末狀，無明顯顆粒。粉末轉移到1.5ml RNase Free Tubes加入500μl Lysis Buffer,高速渦旋30秒，室溫靜置5分鐘，12000rpm室溫離心5分鐘，保留上清。
可選二：研磨棒或者組織研磨儀
將每10mg-20mg(10mg組織約等于米粒大小)加500μl Lysis Buffer，用研磨棒或組織研磨儀研磨（注意溫度），直至樣本充分裂解，高速渦旋30秒，室溫靜置5分鐘,12000rpm室溫離心5分鐘，保留上清。
2 去除基因組/雜質：將上一步上清轉移到HyperPure gDNA-Filter Columns & collection tubes，12000rpm室溫離心2分鐘，丟棄柱子，保留液體(注意)。
3 加乙醇：加上一步液體0.5倍體積無水乙醇（約250ul）到上一步液體中，用移液器吹打5次混勻。
4 RNA結合：將上一步混合液（若體積大于750ul，分幾次重復此步驟）轉移到HyperPure RNA Columns & collection tubes，12000rpm室溫離心30秒，棄濾液，裝回柱子到收集管中。
5.1 清洗：加入Wash Buffer A 500ul到柱子上，12000rpm室溫離心30秒，棄濾液，裝回柱子到收集管中。
5.2 清洗：加入Wash Buffer B 500ul到柱子上，12000rpm室溫離心30秒，棄濾液，裝回柱子到收集管中。
5.3 清洗：加入Wash Buffer B 500ul到柱子上，12000rpm室溫離心30秒，棄濾液，裝回柱子到收集管中。
6 甩干乙醇：不加液體，空離，12000rpm室溫離心2分鐘。
7 RNA洗脫：將上面(mian)的(de)HyperPure RNA Columns小心(xin)轉(zhuan)移(重要，不要碰到管內(nei)液體(ti))到新的(de)1.5ml RNase Free Tubes，在(zai)膜中央（重要）加入50ul-100ul Elution Water,室溫靜置(zhi)3分(fen)(fen)鐘，12000rpm室溫離心(xin)1分(fen)(fen)鐘，得到的(de)RNA立即(ji)使用貨號#R202/R201#逆(ni)轉(zhuan)錄，或者小份(fen)分(fen)(fen)裝RNA保存在(zai)負80度冰(bing)箱。
本(ben)品僅供科研使(shi)用，不(bu)能用于人和動(dong)物醫(yi)療診斷
