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4minSpin RNA Purification Kit
貨 號：TQ402
保存條件：室溫保存
產品(pin)介(jie)紹(shao)：
本品可(ke)快(kuai)本品可(ke)快(kuai)速（4步室溫離心，6分鐘等(deng)待時間(jian)）從106-107培養細胞提(ti)取總(zong)RNA(miRNA除外)，本(ben)品采用特殊配(pei)方無(wu)需(xu)酚氯仿抽提(ti),可以快速裂解樣本(ben)并直接結合RNA到柱子膜上(省(sheng)去加乙醇步驟)，并抑制核酸酶，保持(chi)RNA完整性。所得的RNA可用于PCR(貨(huo)號R201、T202、G302)，qPCR(貨(huo)號R202、Q204)等實(shi)驗。
產(chan)品組(zu)成：
| 組分 | TQ301-01 (50次) |
| Lysis/Binding Buffer（裂解/結合緩沖液） | 2×30 mL |
| Wash Buffer（清洗液,已加乙醇） | 2×60 mL |
| Elution Buffer （洗脫液） | 10 mL |
| 4minSpinTM RNA Columns & collection tubes(RNA吸附柱和收集管套件) | 100套 |
| RNase Free Tubes(1.5 mL無RNA酶離心管，用于裂解樣本和最后一步洗脫使用) | 200個 |
注意(yi)事項：
盡量使用新鮮樣本，以保證RNA不被降解。
本說明書推薦的最適細胞量能滿足大部分樣本，對于核酸含量過高或者過低樣本，可酌情減少或者增加起始樣本量。
提取過程在室溫進行，試劑不可冷凍(如有沉淀37℃加熱溶解)，以免產生沉淀堵塞純化柱，最后得到的RNA要分裝冷凍保存。
第一步的樣本裂解很重要，裂解后要清澈透亮，如果有不(bu)溶物(wu)可能會(hui)堵塞純化柱。
產品使用：
1.1裂(lie)解(jie)細(xi)(xi)胞(bao)：不(bu)同(tong)培(pei)養器皿(min)(min)對應的(de)細(xi)(xi)胞(bao)量如下(xia)圖，其他類型器皿(min)(min)按照面積計(ji)算(suan)估計(ji)細(xi)(xi)胞(bao)量：
| 培養器皿 | 單孔面積/cm2 | 細胞量 |
| 12孔培養板 | 4.5 | 1 × 106 |
| 6孔培養板 | 9.6 | 2.5 × 106 |
| 3.5 cm 培養皿 | 8 | 2 × 106 |
| 6 cm 培養皿 | 21 | 5.2 × 106 |
| 25 cm2 培養瓶 | 25 | 5 × 106 |
吸凈培養器皿里的培養液，按照106-107細胞量加入500μl Lysis/Binding Buffer，用移液器反復吹打(或者使用細胞刮刀刮下細胞)，直至細胞全部脫落，轉移到1.5ml RNase Free Tubes，充分顛倒混勻10次，靜置1分鐘。
a. 此步驟也可用胰酶消化貼壁細胞8000rpm離心2分鐘后，加入500μl Lysis/Binding Buffer后續操作如上。
b.懸浮細胞收集8000rpm離心2分鐘后，用100ul PBS重懸后（重懸很重要），加入500μl Lysis/Binding Buffer后續操作如上
c. 如果樣本不立即提取需要保存，可以在上述細胞加500μl Lysis/Binding Buffer充分裂解之后（細胞內也有RNase酶，所以要裂解充分，利于Lysis/Binding Buffer抑制RNase酶），保存到-80℃冰箱
1.2 RNA結合：將上(shang)一步裂解產物轉移到RNA Columns & collection tubes，12000rpm室溫離心1分鐘(zhong)，棄濾液。
1.3 RNA清(qing)洗：加入500ul Wash Buffer(重要(yao)，不(bu)要(yao)增加體積),12000rpm室溫離心1分鐘，棄(qi)濾液。
1.4 甩干乙醇：不(bu)加液體，空離，12000rpm室溫(wen)離心1分鐘。
1.5 RNA洗脫(tuo)：將上面的RNA Columns小心轉移(重要(yao)，不(bu)要(yao)碰到管內液體)到新的1.5ml RNase Free Tubes，在膜中央(yang)（重要(yao)）加入25-50ul Elution Buffer,室溫(wen)靜(jing)置1分鐘，12000rpm室溫(wen)離心1分鐘，得到的RNA立即使用本公司(si)逆(ni)轉錄試劑盒(he)（貨號：R202）進(jin)行逆(ni)轉錄實(shi)驗，或者(zhe)小份分裝RNA保(bao)存在負80度冰箱。
本品(pin)僅供科研使用，不能用于人和動(dong)物醫療診斷(duan)
