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HyperScript^TM III 1st Strand cDNA SynthesisKit with gDNA Remover

貨    　號：R201

保(bao)存(cun)條件：- 20 ℃長期(qi)儲存

產品介紹：

本(ben)(ben)品為(wei)以(yi)RNA為(wei)模板(ban)合成(cheng)(cheng)1st Strand cDNA 的(de)(de)試劑盒(he)，包含gDNA去除(chu)和逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)(lu)(lu)兩個(ge)部(bu)分。通過(guo)使用不同的(de)(de)逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)(lu)(lu)引物本(ben)(ben)試劑盒(he)既可(ke)以(yi)合成(cheng)(cheng)全長(chang)cDNA用于克(ke)隆，又可(ke)以(yi)合成(cheng)(cheng)高度均一(yi)的(de)(de)cDNA用于qPCR定量。gDNAremover可(ke)以(yi)快速去除(chu)RNA樣本(ben)(ben)中殘留的(de)(de)基(ji)因組DNA，而其(qi)(qi)活(huo)性被(bei)隨后加入組分抑制，保證了新合成(cheng)(cheng)的(de)(de)cDNA不被(bei)降解(jie)。試劑盒(he)所使用的(de)(de)逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)(lu)(lu)酶(mei)是(shi)基(ji)于M-MLV定向進化(hua)(hua)而來的(de)(de)新一(yi)代逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)(lu)(lu)酶(mei)，具有(you)更(geng)低的(de)(de)RNase H活(huo)性、更(geng)高的(de)(de)熱穩(wen)定性和cDNA合成(cheng)(cheng)效率(lv)，搭配為(wei)其(qi)(qi)優化(hua)(hua)的(de)(de)最適buffer，可(ke)以(yi)獲得15k以(yi)上的(de)(de)全長(chang)cDNA。

產品組成：                 ;

溫馨提示(shi)：

·5x RT Mix 若出(chu)現白色沉淀，請(qing)顛倒混勻確保沉淀完(wan)全溶解后使用。

·為保證實驗(yan)成(cheng)功率和(he)準確性，請勿使用過度降解(jie)的RNA。

·配置反應液時，請使(shi)用(yong)RNase-free槍頭、Microtube等(deng)。

·若后(hou)續為定量PCR(qPCR)，逆轉錄15 min；若后(hou)續為克隆實驗，逆轉錄45 min。

產品使用：

1.RNA熱變性(xing)（可選,5kb以上片段克隆為必(bi)須步驟）

請配置(zhi)如下反應液(ye)：

70℃處理(li)5min后(hou)立即(ji)冰浴2min。

注：熱變性處(chu)理RNA，可以打開RNA的(de)高級(ji)結構，有利于后(hou)續逆(ni)轉(zhuan)錄反應。若后(hou)續實驗為(wei)PCR，且目的(de)片段(duan)大(da)于5k，不可省略該步驟。如果加入的(de)為(wei)mRNA：10 pg - 500 ng。

2.gDNA去除體系(xi)配置(zhi)及反應程序

若選擇步(bu)驟1，在(zai)上述混合液中加入(ru)2 μL 5 × gDNA remover 混勻后42℃ 2min；

3.配(pei)置(zhi)逆轉錄(lu)反應體(ti)系

請配置如下反(fan)應液：

注(zhu)：1. 后續實驗為(wei)克(ke)隆(long)實驗，若(ruo)RNA來(lai)源于真核生(sheng)物，只(zhi)需使用Oligo (dT)20VN即可，加入Random Primers會降低全(quan)長cDNA的產量；

           若RNA來源于原核生物，只需使用Random Primers 或(huo)基因特異性引物(2pmol)。

       2. 后續實驗為qPCR，請同時加入Oligo(dT)20VN和Random Primers以獲(huo)得在(zai)mRNA不同位置逆轉(zhuan)錄效(xiao)率均一的cDNA。

4.逆轉(zhuan)錄(lu)反應(ying)程序

請(qing)按如下條(tiao)件進(jin)行逆轉錄反應(ying)：

注：1. 25℃ 5min有助于Random Primers與RNA結合，若不使用Random Primers該步(bu)驟可(ke)省略。

       2. 若后續實驗(yan)(yan)為克(ke)隆(long)實驗(yan)(yan)，逆轉錄45min即(ji)可產生最大量的全長cDNA；若后續實驗(yan)(yan)為qPCR，逆轉錄15min即(ji)可。

       3. HyperScriptTM III 在37-60℃均有較強(qiang)活性，37℃即(ji)可(ke)滿足絕大(da)多數實(shi)驗；若目標RNA區域(yu)有高GC部分，可(ke)提高逆轉錄溫(wen)度至50℃。

       4. 85℃ 5s 可(ke)以失活(huo)逆轉(zhuan)錄(lu)酶和gDNA remover，請勿(wu)省略(lve)該步驟。

逆轉錄產物可(ke)直接用于下游實驗(yan)，也(ye)可(ke)置于4℃短暫放置，3-6個月內-20℃保存，長期存放請置于-80℃冰箱，cDNA小份(fen)分裝避免(mian)反復凍融(rong)。

常見問題及解(jie)決方(fang)案：

本品僅供科研使用，不能用于人和動物醫療診斷(duan)