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Fast T4 DNA Ligase                         ;                      

貨    　號：B102

保存條件：- 20 ℃

產品介紹：

本品中的Fast T4 DNA Ligase能催化(hua)dsDNA或者RNA的5'- 磷(lin)酸末端和(he)(he)3'-羥(qian)基(ji)形成磷(lin)酸二酯鍵，該酶催化(hua)平(ping)滑末端或粘性末端DNA的連接，修復雙鏈DNA，RNA，DNA/RNA 雜(za)交鏈中的單(dan)鏈切口(kou)。本品中Fast T4 DNA Ligase和(he)(he)2 × Fast Reaction Buffer 經(jing)過了精心優化(hua)，能實現室(shi)溫下5分鐘快速連接反應。

產品組成：

產品使用：

A.粘性末端連(lian)接(jie)/平末端連(lian)接(jie)

2× Fast Reaction Buffer請混(hun)勻(yun)放置(zhi)冰上(shang)備用(yong)，按照以下順序加樣，并使用(yong)移液器(qi)輕(qing)柔混(hun)勻(yun)：

※   線性化載(zai)體pmol = [( X ng ÷ 長(chang)度 ) × 1.5] 。

   例如(ru) 100ng 的(de)5000 bp載體pmol = [(100 ng ÷ 5000 bp）× 1.5 ]= 0.03 pmol。

§插(cha)入(ru)片段(duan)ng = [(插(cha)入(ru)片段(duan)長度(du)(du) ÷ 載體長度(du)(du))× 載體的ng ×   摩爾倍數1-5]。

   例如800 bp片段插入(ru)5000 bp載體(ti)，線性化載體(ti)量為100 ng，插入(ru)片段ng = [(800 bp ÷ 5000 bp) × 100 ng ×   5倍] =80 ng。

B.連接反應條件(jian)

室溫(25℃) 孵(fu)育(yu)5分鐘，反(fan)應(ying)后-20℃存儲或者放置冰上用于(yu)轉化。

C.連接產物轉化（使用化學感受(shou)態(tai)可參照以(yi)下步驟，或(huo)以(yi)使用的感受(shou)態(tai)說(shuo)明書(shu)為準）

C.1   在冰(bing)上(shang)解(jie)凍克(ke)隆感受態細(xi)胞,取10 μl連接產物加(jia)入到100 μl感受態細(xi)胞中，輕彈管壁混勻，冰(bing)上(shang)靜置30 min(連接產物不要超(chao)過感(gan)受(shou)態          體積的1/10)。

C.2   42℃水浴熱激45秒(miao)，立即冰上冷卻2-3分鐘。加900 μl SOC或LB培(pei)養基(不添加抗(kang)生素(su))，37℃搖菌1小時(轉(zhuan)速200 - 250 rpm)。

C.3   將相應抗性的(de)LB平板(ban)固體培(pei)養基(ji)在37℃培(pei)養箱中預熱。5,000 rpm離心5 min，棄掉900 μl上清(qing)。用剩余培(pei)養基(ji)將菌(jun)體重懸，用無(wu)               菌(jun)涂(tu)布(bu)棒在含有正確抗性的(de)平板(ban)上輕(qing)輕(qing)涂(tu)勻。

C.4   37℃培養箱中倒置(zhi)培養12-16 h。

本(ben)品僅供科研使用，不能(neng)用于人和動物醫療診斷(duan)