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Cas9 Nuclease with NLS     ;                                          

貨    　號：C102

保(bao)存條件：-20℃

產品介紹：

Cas9Nuclease with NLS是(shi)N端和C端都帶有核定位(wei)信號的(de)RNA導向的(de)序列特異性(xing)雙(shuang)鏈(lian)DNA內切(qie)酶。本(ben)品是(shi)大腸桿菌表達純化的(de)超高純度的(de)Cas9活(huo)性(xing)蛋(dan)白。

產品(pin)組成：

產(chan)品特點：

體外(wai)基(ji)因編(bian)輯

體(ti)內基因編輯

產品使用：

A.體外基因(yin)編輯(ji)

為(wei)了保證切割(ge)效率(lv)，Cas9 Nuclease和(he)sgRNA、targetDNA的(de)摩爾比例至少為(wei)10:10:1或者更高。實(shi)驗(yan)前用(yong)(yong)(yong)無(wu)核(he)酸酶(mei)(mei)的(de)水(shui)稀釋(shi)(shi)sgRNA到0.9 μM,同時用(yong)(yong)(yong)無(wu)核(he)酸酶(mei)(mei)的(de)水(shui)稀釋(shi)(shi)DNA到0.09 nM，同時用(yong)(yong)(yong)無(wu)核(he)酸酶(mei)(mei)的(de)水(shui)稀釋(shi)(shi)DNA到0.09 μM。過程(cheng)中使用(yong)(yong)(yong)的(de)耗材和(he)試劑(ji)都請(qing)使用(yong)(yong)(yong)無(wu)核(he)酸酶(mei)(mei)級別(bie)，防止引(yin)入RNA酶(mei)(mei)。

1.請在冰上配置以(yi)下(xia)體系：

2.37℃孵育(yu)10分鐘。

3.加入 7 μL 0.09 nM的DNA。移液槍輕(qing)輕(qing)吹打混(hun)勻。

4.37℃孵(fu)育60分鐘。

5.產物直接用于瓊(qiong)脂糖檢測。用于下(xia)游實驗(yan)。

B.體內(nei)基因編輯

1.請(qing)在冰上配置(zhi)以下體系：

sgRNA可用(yong)nuclease-free 水稀釋，Cas9 Nucleas with NLS可用(yong)Reaction Buffer 稀釋。

2.輕(qing)輕(qing)混勻，室溫(wen)25℃孵育10分鐘。

3.室(shi)溫下配置以下體(ti)系：

4.輕(qing)輕(qing)混勻，室溫25℃孵(fu)育20分鐘。

5.取(qu)25 μL步驟3的混合物(wu)到96孔板的單孔里(li)面，再取(qu)125 μL細胞（32萬/mL）。上下左(zuo)右輕(qing)輕(qing)晃動(dong)96孔板混勻(yun)。

6.細胞培養48 - 72小時(shi)。

7.T7內切(qie)酶(mei)檢(jian)測編輯效率(lv)（參照T7內切(qie)酶(mei)說明書(shu)）。

C.體(ti)內基因(yin)編輯

電轉(zhuan)實驗請(qing)參照相應電轉(zhuan)儀(yi)說(shuo)明，電轉(zhuan)實驗比(bi)Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent效果(guo)更好。

本品僅供(gong)科(ke)研使用(yong)(yong)，不能(neng)用(yong)(yong)于人和動(dong)物醫療診(zhen)斷