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HyperScriptTM III 1st Strand cDNA Synthesis Kit
貨 號：R101
保存條件：- 20 ℃長期儲(chu)存
產品介紹：
本品為(wei)以(yi)RNA為(wei)模板合(he)成1st Strand cDNA 的(de)試(shi)(shi)劑盒(he)(he)。通過(guo)使用不同的(de)逆轉(zhuan)錄引物本試(shi)(shi)劑盒(he)(he)既可以(yi)合(he)成全(quan)長cDNA用于克(ke)隆，又可以(yi)合(he)成高度均一的(de)cDNA用于qPCR定量。試(shi)(shi)劑盒(he)(he)所使用的(de)逆轉(zhuan)錄酶是(shi)基于M-MLV定向進化(hua)而來的(de)新一代(dai)逆轉(zhuan)錄酶，具有更(geng)(geng)低的(de)RNase H活(huo)性(xing)、更(geng)(geng)高的(de)熱穩定性(xing)和cDNA合(he)成效(xiao)率，搭配為(wei)其優化(hua)的(de)最適buffer，可以(yi)獲得(de)15k以(yi)上的(de)全(quan)長cDNA。
產(chan)品組成：
溫(wen)馨提示：
·5x RT Mix 若(ruo)出現白色沉淀，請(qing)顛倒混勻確保沉淀完全溶解后使用。
·為保證實驗(yan)成功(gong)率和準確(que)性，請勿使用過度降解的RNA。
·配置反應液時，請使用RNase-free槍頭、Microtube等(deng)。
·若后(hou)續為定量PCR(qPCR)，逆(ni)轉錄(lu)15 min；若后(hou)續為克隆實驗，逆(ni)轉錄(lu)45 min。
產品使用：
1.配置(zhi)逆轉錄(lu)反應體(ti)系(xi)
請配置如(ru)下反應液：
注：1. 后續實驗(yan)為克隆實驗(yan)，若RNA來(lai)源于真(zhen)核生(sheng)物(wu)，只需使用(yong)(yong)Oligo (dT)20VN即(ji)可，加入Random Primers會降低全長cDNA的(de)產量；若RNA來(lai)源于原核生(sheng)物(wu)，只需使用(yong)(yong)Random Primers 或基(ji)因特異(yi)性引物(wu)(2pmol)。
2. 后續(xu)實驗為(wei)qPCR，請同時加入Oligo(dT)20VN和Random Primers以獲得在mRNA不(bu)同位置逆轉錄效率(lv)均一的cDNA。
3. 如果使用純化后(hou)的mRNA，加入的量10 pg - 500 ng。
2.逆(ni)轉錄反(fan)應程序
請(qing)按如下條件(jian)進(jin)行逆轉錄(lu)反應：
注：1. 25℃ 5min有助(zhu)于Random Primers與RNA結合(he)，若不使用Random Primers該(gai)步驟可省(sheng)略。
2. 若(ruo)(ruo)后(hou)續實驗(yan)(yan)為克(ke)隆實驗(yan)(yan)，逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)45min即可產(chan)生最大量(liang)的(de)全(quan)長cDNA；若(ruo)(ruo)后(hou)續實驗(yan)(yan)為qPCR，逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)15min即可。
3. HyperScriptTM III 在(zai)37-60℃均有較強活(huo)性，37℃即可(ke)滿足絕(jue)大(da)多數(shu)實(shi)驗；若目(mu)標RNA區(qu)域有高GC部分(fen)，可(ke)提高逆(ni)轉(zhuan)錄溫度(du)至50℃。
4. 85℃ 5s 可以(yi)失活逆轉(zhuan)錄(lu)酶和gDNA remover，請勿省略(lve)該步驟。逆轉(zhuan)錄(lu)產物可直接(jie)用于下游實驗，也(ye)可置于4℃短暫放置，3-6個月內-20℃保存，長期存放請置于-80℃冰箱，cDNA小份(fen)分裝避免反復凍融。
逆轉錄產(chan)物可(ke)直接用于下游實驗，也可(ke)置(zhi)于4℃短暫放置(zhi)，3-6個月內-20℃保存，長期存放請置(zhi)于-80℃冰箱，cDNA小份分裝避免反(fan)復凍融。
常見問題及解(jie)決方案：
本(ben)品(pin)僅(jin)供科研使(shi)用，不能用于人和(he)動物醫療診斷
