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Cas9 Nuclease with NLS
貨 號:C102
保存條件:-20℃
產品介紹(shao):
Cas9Nuclease with NLS是N端和C端都帶有核定(ding)位信號(hao)的RNA導向的序列特異性雙鏈DNA內切酶(mei)。本品是大(da)腸桿菌表達純化的超高純度的Cas9活性蛋白。
產品組成:
產品特(te)點:
體外基因編輯
體內(nei)基因編輯
產品使用:
A.體外(wai)基因(yin)編輯(ji)
為了保證切割效(xiao)率,Cas9 Nuclease和(he)sgRNA、targetDNA的(de)摩爾(er)比(bi)例至少為10:10:1或者更高。實驗前用(yong)(yong)無核(he)酸(suan)(suan)酶(mei)(mei)的(de)水(shui)稀(xi)釋(shi)(shi)sgRNA到(dao)0.9 μM,同(tong)時用(yong)(yong)無核(he)酸(suan)(suan)酶(mei)(mei)的(de)水(shui)稀(xi)釋(shi)(shi)DNA到(dao)0.09 nM,同(tong)時用(yong)(yong)無核(he)酸(suan)(suan)酶(mei)(mei)的(de)水(shui)稀(xi)釋(shi)(shi)DNA到(dao)0.09 μM。過程中(zhong)使用(yong)(yong)的(de)耗(hao)材和(he)試(shi)劑都請(qing)使用(yong)(yong)無核(he)酸(suan)(suan)酶(mei)(mei)級(ji)別(bie),防(fang)止(zhi)引入RNA酶(mei)(mei)。
1.請在冰上配(pei)置(zhi)以下體系:
2.37℃孵育10分鐘。
3.加入 7 μL 0.09 nM的DNA。移液槍輕輕吹打混勻。
4.37℃孵育60分(fen)鐘。
5.產物直(zhi)接用(yong)于瓊(qiong)脂糖檢測。用(yong)于下游實驗。
B.體內(nei)基因編輯
1.請在冰上配置以下體系:
sgRNA可用(yong)nuclease-free 水稀(xi)釋,Cas9 Nucleas with NLS可用(yong)Reaction Buffer 稀(xi)釋。
2.輕(qing)輕(qing)混勻,室溫(wen)25℃孵育10分(fen)鐘。
3.室溫(wen)下(xia)配置以下(xia)體系:
4.輕輕混勻,室溫25℃孵育(yu)20分鐘。
5.取25 μL步驟3的混合物(wu)到96孔板(ban)的單孔里面,再取125 μL細胞(32萬(wan)/mL)。上下左右輕輕晃(huang)動96孔板(ban)混勻。
6.細(xi)胞(bao)培(pei)養48 - 72小(xiao)時。
7.T7內(nei)切酶(mei)檢測編輯(ji)效率(參照(zhao)T7內(nei)切酶(mei)說明(ming)書)。
C.體內基因編輯
電轉實驗(yan)請參照相應電轉儀說(shuo)明,電轉實驗(yan)比Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent效果(guo)更好。
本品僅(jin)供(gong)科研(yan)使用,不能(neng)用于(yu)人和動物醫療診(zhen)斷